Tot nu toe kon KHV alleen worden vastgesteld met behulp van qPCR en ELISA, testen die relatief duur zijn en relatief veel tijd kosten. Sinds kort bestaat echter de mogelijkheid om op een snelle en eenvoudige manier te bepalen of een Koi die symptomen van KHV vertoont ook daadwerkelijk besmet is, met de FASTest® KOI HV.

De test is 100% specifiek, dus toont alleen KHV aan en geen andere virussen

Een besmetting met KHV wordt momenteel vaak vastgesteld na het doen van een qPCR of een ELISA. In het kort, qPCR (Quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction) is een laboratoriumtechniek die wordt gebruikt om een specifiek deel van het DNA (waar genetische informatie in ligt opgeslagen) te multipliceren tot er genoeg van is om het te analyseren. Met andere woorden, als er KHV aanwezig is in de Koi dan zal dit met behulp van qPCR worden gemultipliceerd en aangetoond. Wanneer er geen KHV is, zal de qPCR een negatief resultaat geven. Het nadeel van qPCR is dat de Koi moet worden opgeofferd om weefsel af te nemen, dat de test niet erg gevoelig is en dat het een aantal dagen duurt voordat de resultaten bekend zijn. Wanneer een Koi besmet is met KHV maar niet ziek (i.e. drager is van KHV) kan KHV niet worden aangetoond.

De andere techniek die wordt gebruikt is de ELISA (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay) waarmee bepaalde eiwitten kunnen worden gemeten, in bloedmonsters of een monster van andere lichaamsvloeistoffen. Hiervoor wordt gebruikt gemaakt van antilichamen tegen de bepaalde eiwitten. Een zogenoemd primair antilichaam wordt toegevoegd aan het monster en zal binden aan het bepaalde eiwit dat je wilt meten. Daarna wordt een tweede, ofwel secundair, antilichaam toegevoegd die bindt aan het primaire antilichaam. Het secundaire antilichaam is gemerkt met bijvoorbeeld een kleurstof. Die kleurstof kan dan worden gemeten en des te sterker de kleur, des te meer eiwit in het sample. Voor het aantonen van KHV kan met ELISA worden gekeken naar de aanwezigheid van het eiwitmantel van het virus of naar antilichamen van de Koi tegen KHV, in bloed en ontlasting. Ook deze test zal alleen KHV aantonen wanneer de Koi ziek is of net ziek is geweest. Resultaten van de ELISA zijn vaak binnen 24 uur beschikbaar.

Heel simpel gezegd werkt de test als een soort ‘zwangerschapstest’, maar dan voor KHV.

Er is nu echter een nieuwe test op de markt. Met de FASTest® KOI HV claimt het bedrijf MEGACOR Diagnostik GmbH de eerste snelle en specifieke diagnostische test voor KHV te hebben ontwikkeld, die gewoon bij de vijver kan worden gebruikt. Heel simpel gezegd werkt de test als een soort ‘zwangerschapstest’, maar dan voor KHV.

Voor te test dient een afstrijkje te worden gemaakt van beide kieuwen van de Koi met een wattenstaafje. Dit wattenstaafje wordt vervolgens in een testbuisje met een bepaalde vloeistof geplaatst en het sample moet dan worden gemixt met de vloeistof. De druppel van de vloeistof wordt daarna met een pipetje op de teststrip gedruppeld. Na 15 minuten wachten is het bekend of de Koi besmet is met KHV.

De procedure van de FASTest® KoiHV

In de teststrip zitten antilichamen die binden aan KHV antigenen (i.e. KHV eiwitten) en vormen een antilichaam-antigen complex. De vloeistof ‘loopt’ door de teststrip en neemt het antilichaam-antigen complex mee. Een stukje verder in de teststrip blijft het complex hangen en veroorzaakt een verkleuring, dus een positief resultaat. Wanneer er geen KHV antigenen in de vloeistof zitten zal er geen complex worden gevormd en dus geen verkleuring. Er is een controle ingebouwd die verkleurd door alles wat er langs gaat. Als deze dus niet gekleurd is, is de test niet goed gegaan.

De gevoeligheid van de test is ongeveer 72%, wat betekend dat er in 28% van de gevallen geen KHV wordt aangetoond terwijl dit er volgens de qPCR test wel is. De test is 100% specifiek, dus toont alleen KHV aan en geen andere virussen. De detectielimiet is 10E4-10E6 KHV/ml, wat betekend dat KHV alleen kan worden aangetoond in Koi waarvan op basis van symptomen wordt verwacht dat ze besmet zijn met KHV of in Koi die net dood zijn. De test kan worden geleverd in dozen met 2, 10 of 25 testen. De kosten voor 1 test zijn ongeveer 10 euro.

De FASTest® Koi HV

Op dit moment is het voor mij nog onduidelijk of de  FASTest® KOI HV beschikbaar komt voor particulier gebruik of alleen voor gebruik voor dierenartsen, en waar het kan worden verkregen. Het Belgische bedrijf Okapi Sciences NV blijkt een distributieovereenkomst afgesloten met MegaCor Diagnostik GmbH en geeft in het laatste nieuws aan dat het tegen eind september 2012 beschikbaar is.

Over Janine Doorduin

Dr. Janine Doorduin heeft zich als (neuro)bioloog in het dagelijks leven, toegelegd op het Koi Herpes Virus, maar haar interessegebied bestrijkt het hele spectrum aan pathogenen. Ook is ze Koi fotograaf, auteur, mooi, hobbyist en interviewer. Het meest bijzondere aan Koi vind ze de persoonlijke band die je ermee opbouwt.

Reacties

3 reacties

  1. Hoi Janine,

    Wat fijn dat je ons hiervan kennis laat nemen. Dit soort nieuws lees je niet overal, terwijl het toch zo belangrijk is om te weten! De wetenschap zit dus overduidelijk niet stil.

    Groet,
    Engel

  2. De eerste alinea heeft mijn aandacht..

    Sinds kort bestaat echter de mogelijkheid om op een snelle en eenvoudige manier te bepalen of een Koi die symptomen van KHV VERTOONT ook daadwerkelijk besmet is, met de FASTest® KOI HV.

    Mag ik hieruit afleiden dat bij een koi zonder khv symptomen dit niet aangetoont zal worden? Jammer dat de test voor 72% sluitend is. Het voordeel zal wel zijn dat je de test thuis kan uitvoeren als er zieke vissen zijn. Wel goed dat de bestrijding van KHV nog steeds aandacht heeft. gr ewit

  3. Joop van Tol on

    In principe hoef je voor een (RT)PCR test niet persé een vis op te offeren. PCR wordt ook wel toegepast op een stukje kieuw dat wordt afgenomen van een levende vis. De kans op een positieve uitslag, wanneer de koi vlak voor, tijdens of vlak na een KHV uitbraakt getest wordt is dan wel kleiner, aangezien bij een PCR op een dode vis ook nierweefsel wordt meegenomen in de test.

    Een 72% score vind ik te laag om waarde te hechten aan dit soort testen, zeker als je bedenkt dat ook bij deze test geen dragerschap kan worden aangetoond. Alleen als de test positief is, kun je er waarde aan hechten, ervan uitgaande dat het aantal “vals-positieve” uitslagen minimaal is.

    Joop

Messenger icon
Send us a message via your Messenger App